液体培养手工法使用的液体培养基检测系统的发展趋势

一、修炼方法

结核杆菌培养是根据结核杆菌的生长规律，根据营养代谢条件，人为营造有利于结核杆菌生长的环境，抑制其他细菌的生长，从而达到目的。结核分枝杆菌的分离。结核分枝杆菌培养按培养基形状主要分为固体培养基和液体培养基，根据培养方法可分为固体培养和液体培养。固体培养基主要包括罗氏、改良罗氏培养基和琼脂基或7H11，以鸡蛋液为基质，含有高浓度的孔雀石绿以抑制其他细菌的生长。固体培养成本低、污染率低、培养成功率高。可通过观察形成的菌落形态初步鉴别。适合在各级实验室广泛使用，但固体培养时间较长，需要观察阴性培养结果8 阳性培养结果平均需要3～4周才能观察到明显的菌落，而较长的培养时间会降低临床应用价值。

二、液体培养

液体培养法是指结核杆菌在液体培养基中生长。由于液体培养基中营养成分复杂，常添加促生长因子，可为结核杆菌的生长提供充足的营养；结核杆菌在液体环境中生长，能充分接触养分，更充分地吸收养分；此外，液体培养还添加了多种抗生素来抑制杂菌的生长。

(一)人工培养

人工方法使用的液体培养基主要是一系列复合培养基，由基质、营养补充剂和抗生素组成，也有商业成分出售。使用时，将不同的成分混合在一起。这种培养基主要用于科学研究和疾病监测。主要是7H9和中等。

(二)自动培养

为了提高结核分枝杆菌的检测效率，简化培养操作，缩短培养时间，研制了自动化的结核分枝杆菌培养系统。

1。 460系统：1969年发明了一种半自动检测系统，以放射性14C棕榈酸为底物，检测细菌在液体培养基生长过程中释放的放射性14CO2，并计算出细菌生长指数GL。 1980年将该技术应用于结核分枝杆菌的培养，出现了460TB分枝杆菌培养及药敏检测系统。该检测系统可自动检测液体培养基中结核杆菌的生长情况，对涂阳和涂阴标本具有良好的分离培养效果。与传统的L-J培养法相比，可提高临床标本分离培养的阳性率。 15%～20%，与L-J培养法的3～5周相比，培养时间缩短至8～14天。

2。 MGIT 960 系统：MGIT 960 系统是对 460 TB 的改进，并使用分枝杆菌生长指示管 (MGIT)。 MGIT 培养管底部的硅树脂含有一种氧猝灭荧光剂。在分枝杆菌的生长过程中，它吸收分散在培养管中的O2，并放出CO2。随着管内 O2 的逐渐流失，荧光剂不再受到抑制。 MGIT 培养管在用紫外光观察时会发出荧光。并且，荧光的强度与 O2 的消耗量直接相关。 MGIT应用于MGIT 960系统，可定期采集结核杆菌生长过程中产生的化学信号等变化，自动上报监测结果，实现结核杆菌培养全自动化。 MGIT 960 解决了 460 TB 放射性物质污染问题，让环境和实验者更安全。

3。 BacT/ALERT 3D 系统：BacT/ALERT 3D 检测系统通过检测液体培养基中释放的 CO2 量来确定是否有细菌生长。当分枝杆菌在培养管生长过程中代谢产生CO2时，培养瓶底部的透气传感器颜色会发生变化，以增加系统监测的反射率，发光二极管（LED）投射光到传感器上，由光电检测 仪器测量反射光，产生的 CO2 越多，反射的光越多，产生的 CO2 量与样品瓶中的初始 CO2 水平比较，仪器报告正面或负面。

4。分枝杆菌液体培养系统：分枝杆菌液体培养是基于压力传感检测技术，重点是血液培养和结核分枝杆菌培养，但由于生物安全和操作技术缺陷，该技术在结核实验室的使用受到限制。

简而言之，液体培养可以提高结核分枝杆菌分离的阳性率，缩短培养时间；但液体培养无法肉眼观察菌落形态，培养阳性产物需涂片染色、镜检才能确定是否为结核分枝杆菌；自动化检测设备可简化检测操作，降低实验室生物安全风险，但成本大大增加，增加了诊断成本。

三、药敏试验培养法

为了获得结核杆菌的耐药性，常采用体外药敏试验培养法。药敏试验方法是在含有某种药物的培养基上接种一定量的结核杆菌。耐药菌株被定义为能够在抑制其生长的最低药物浓度 (MIC) 下生长的耐药菌株，否则定义为敏感菌株。药敏试验所用介质主要包括固体和液体介质；主要方法有绝对浓度法和比例法。绝对浓度法在药物浓度高低的培养基上接种10-3mg结核杆菌。检测结果可以在一定程度上反映结核杆菌的耐药性。要求非常严格，接种过多会导致假耐药结果。比例法可以降低绝对浓度法对结核杆菌接种量的严格要求。比例法在含药培养基和空白对照培养基上同时接种高、低浓度的结核杆菌液体培养方法，比较在含药培养基和空白培养基上的生长情况。当含药培养基上生长的菌落大于空白培养基上生长菌落的1%时，判定结核分枝杆菌耐药，否则判定为敏感。

四、液体药敏试验培养法

2008年，世界卫生组织制定并发布了关于二线抗结核药物药敏试验的指导文件。该版本详细说明了一、二线药物试验中使用的不同介质的药物含量。固体介质为LJ、7H10、7H11，液体介质为460、MGIT 960。目前TB实验室采用的液体药敏试验方法主要是MGIT 960的修正比法药敏试验。MGIT 960具有一线抗结核药物（异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素）培养基，以及独特的吡嗪酰胺培养基，因为吡嗪酰胺只能在酸性环境中起作用，在中性pH培养基中不起作用，一般培养基不能进行此项试验。对于二线药物，MGIT 960尚未推出商业化介质，用户需要添加药物进行制备。 WHO推荐MGIT 960培养基中使用的二线药物含量。

五、质量控制

只有在实验室进行质量控制的测试方法才能保证测试结果的准确性。 《结核分枝杆菌分离培养标准化操作规程和质量保证手册》是国家结核病参比实验室参照世界卫生组织推荐的方法对结核分枝杆菌培养制定的质量控制规程。常规结核病实验室培养质量控制有两个参考指标。 、一定时间内的污染率和涂阳培养阴性率，培养物污染率应控制在2%～5%；新收治的肺结核患者涂阳培养阴性率应控制在10%以内。如果培养污染率小于2%，说明实验室在隔离培养初期的去污过程中杀灭了过多的分枝杆菌，存在过度处理的问题；如果污染率大于5%，也说明去污不充分。被杀了，预处理还不够。但液体培养的污染率通常高于固体培养，液体培养更需要防止操作过程的污染。如果涂阳和涂阴率高于10%，说明实验室涂片​​显微镜检查质量存在问题或培养技术不符合要求。

总之，结核分枝杆菌液体培养可以提高结核病检测的灵敏度，液体培养和液体药敏试验可以缩短检测时间，自动化操作可以提高检测效率液体培养方法，规范结果判断；液体培养和液体药敏试验适用于结核病和耐药结核病的诊断、发现、疗效评价和流行病学监测。