试管液体接种液体培养基的操作有MPN法检测/大肠杆菌

液体培养基接种是利用接种环、移液管或移液管等工具将细菌细胞或菌液转移到试管、三角瓶等容器中的液体培养基中的一种接种方法。操作与前面的斜面接种基本相同，但应注意液体培养基试管口或三角瓶瓶口稍向上，防止培养液流出；擦拭干净并塞上棉塞后，用手掌轻轻敲击试管或轻轻摇晃三角烧瓶，使细胞混合均匀。

试管液体接种

试管液体接种是将一定体积的样品悬浮液加入到装有指定液体培养基的试管中，或将在标准规定条件下培养的一定体积的培养基加入到指定的液体培养基中（有时指从接种环中取一个环，或移液器移液器取一定体积，如0.1ml、1ml等）。试管内液体接种操作包括大肠菌/大肠杆菌的MPN检测，沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌的二次富集转移操作。

这里是使用移液器将一定体积的样品悬浮液转移到含有指定液体介质的试管中的示例，

①用酒精棉对工作台面进行消毒。将移液器吸头盒放在酒精灯右侧，靠近酒精灯。将需要转移的试管插入试管架，放在酒精灯左手附近。将移液器调整到适当的刻度，并将其放在靠近右手的架子上。垃圾桶放在右手够不到的地方。

②点亮酒精灯，靠近酒精灯火焰的左手打开移液器吸头盒，右手用力插入吸头两次，防止吸头松动脱落。拉出移液器并将其盖住。分配器吸头盒盖。左手取待转移的试管，试管底部在左手掌心，移液器吸头和试管口应在酒精火焰周围的无菌区灯。

③ 将试管伸到右手边。右手食指、中指和无名指握住移液器液体培养方法，大拇指抵住移液器按钮，小指和手掌下缘夹住试管盖用力拉出。如果操作者手小，可以用食指、无名指和小指握住移液器，大拇指仍然放在液体按钮上。伸出中指，用中指内侧和食指、无名指外侧夹住试管帽。将试管口和移液器吸头靠近火焰，烧试管口一周，只需将吸头插入靠近火焰的试管口，将移液器按钮按到一档（轻轻推不要动）。不要将移液器吸头贴在试管底部，而是倾斜试管，使液位接近试管口且不会通过吸头尖端。慢慢松开右手拇指，让液体慢慢吸入洗发水中，注意不要吸入空气。如果吸入空气液体培养方法，则必须将液体强制返回管中以重新吸收。当右手大拇指完全松开后，收回移液器，注意吸头尽量保持在酒精灯火焰周围，并保持吸头朝下，以防液体回流到移液器中造成污染。

④ 吸完液体后，将移液器从试管中取出，将移液器吸头移到远离操作者的酒精灯火焰一侧，将试管口放在火焰上灼烧消毒。

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⑤灭菌后，用右手小指快速盖住试管盖。此时，移液器吸头仍应处于火焰形成的无菌区域内，且不应距离酒精灯的火焰太远。将盖子盖在试管上以将试管放回原位。

⑥左手取待转入液体的试管，右手将移液器吸头靠近酒精灯的火焰。

⑦保持右手握住移液器，取下试管盖，烧掉试管口。将移液器吸头抵住试管口内壁，慢慢将移液器按钮推到底（完全推到第二档，使残留在吸头尖端的液体也流出）。推出液体时注意不要将吸头深入管底，也不要用力过猛导致液体飞溅。

⑧左手将试管口靠近火焰进行消毒，将移液器吸头移至酒精灯火焰的另一侧。再烧试管口

⑨ 右手握住移液器，盖上试管盖，将试管放回原位。移取液体后，按下移液器滑块，将吸头移至废液箱，然后将移液器放回架子上。关掉酒精灯，消毒清洁台面。

三角瓶液体接种

与试管中的液体接种培养相比，三角瓶中的接种培养的优点是通风效果好。在霉菌或某些细菌的回春培养或摇床培养中较为常见。操作与上述液体试管接种操作基本相同。当液体最后加入三角瓶时，将三角瓶倾斜，移液器吸头抵住三角瓶内壁，缓慢加入液体，避免飞溅和气泡