液体培养基接种法实验步骤（二，斜面接种时的无菌操作）

二、倾斜培养基接种法（操作） 倾斜接种时无菌操作（1)接种灭菌（2)打开卫生棉条（3)喷嘴灭菌（4)取菌苔（5)接种（6)固定棉塞测试程序（斜面接种法）） 左手握住菌株试管（葡萄球菌或大肠杆菌）和倾斜的培养基右手。分别用右手的小指和手掌、小指和无名指分别拔出两个试管的棉塞，用火焰对试管口进行消毒。使用接种环或接种器针头伸入应变管内，挑取接种 伸入斜面培养管内，先从斜面的底部拖一条接种线到顶部，然后从下往上曲折。完成后，使用火焰对培养管进行消毒或ifice，然后在上面放一个棉塞。 37℃培养。 3. 半固体培养基接种法/穿刺接种法（操作） 穿刺接种法（穿刺接种法）的实验步骤 握住菌株管（大肠杆菌或志贺氏菌）和半固体培养管左手，右手握住接种针。用右手的小指、手掌、小指和无名指分别拔出两根管子的棉塞，用火焰对管口消毒数次。用接种针将接种针插入菌株管中，挑出菌苔进行接种。将半固体的中心垂直刺入管底，然后沿穿刺线退出。将其放回棉塞中，再次对接种针进行消毒。接种后，37℃培养18-24小时，观察生长情况。四、液体培养基接种法（操作） 实验步骤（液体培养基接种法） 用灭菌接种环挑取菌苔进行接种。轻轻研磨，使细菌均匀分布在液体培养基中。

5。细菌在液体、固体和半固体培养基中的生长现象（示教） 在半固体培养基中示教固体培养基上的细菌毛皮和菌落样品：沉淀均匀、浑​​浊。对照样品：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、β链球菌、实验室规则。如果接触到病原菌，一定要坚持无菌操作，穿上白大褂。如有吸入菌液、割伤手指等意外，老师必须报告已经接触过菌液的吸管、载玻片等设备，放入装有2~3% Lysol的容器中实验完成后，组织桌面微生物实验。做完实验后要求认真填写实验报告，并将结果记录在浙大实验报告中： 实验日期、年份、目的和要求（必填） 实验内容和原理（必填） 操作主要设备方法及实验步骤、细菌接种实验内容 1. 革兰氏染色（操作） 2. 细菌接种平板划痕法（操作） 倾斜培养基接种法（操作） 半固体培养基接种法/穿刺接种法（操作） 液体培养基接种法 方法（操作） 细菌在液体、固体和半固体培养基中的生长现象（教学） 显微镜的使用和保护---原理 油镜与其他物镜的区别在于载玻片和物镜不是隔着一层空气，而是隔着一层油的叫油浸系统。

这种油通常由雪松油制成。如果载玻片和物镜之间的介质是空气，则称为干式系统。光线通过载玻片时发生折射和散射，进入物镜的光线明显减少。缩小视场的照度 雪松油的折射率为n=1.515，与玻璃的折射率n=1.52相似。当光线通过载玻片时，它可以通过雪松油直接进入物镜而不发生折射。油浸物镜介质：空气；杉木油镜的鉴别油镜的镜筒最长，镜筒直径最小。对于100x或Oil等油性镜头的使用，首先按照从低倍到高倍的操作步骤找到物像，将观察部分移动到视野中心。转动转盘使大功率镜向一侧移动，在盖玻片上滴一滴雪松油，然后将油镜对准灯孔，使油镜下端接触雪松油（注意操作要慢，以免压碎玻璃）。膜或损坏镜头）。从目镜观察，轻轻上下转动微调器，直到视野中出现清晰的物体图像。油镜使用后，油镜上的雪松油必须用蘸少许二甲苯的镜片纸擦去，二甲苯必须用干的镜片纸巾擦掉。显微镜使用后，升起镜头，取出载玻片标本，转动转盘，使每个物镜不与光孔对准液体培养方法，然后降低镜筒，使物镜靠近载物台，降低聚光镜，最后放回柜子里。 革兰氏染色法由丹麦的 C. Gram 于 1884 年创立，是细菌学中非常重要的鉴别染色方法。通过这种染色方法，可以将细菌鉴定为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）。 ) 两种细菌细胞壁结构革兰氏染色法-原理 G+细菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量低，乙醇不易渗透。

同时乙醇使细胞壁脱水形成屏障，阻止结晶紫-碘络合物从细胞中渗出，因此细菌在初次染色时仍保持紫色。 G-菌的细胞壁结构比较松散，肽聚糖层很薄，外膜含有大量脂类，易被乙醇溶解，增加了细胞壁的通透性，导致结晶紫-碘络合物用乙醇溶解脱色。 ，所以细菌复染时采用红革兰染色法。初染：加入结晶紫溶液，染色1分钟，用水洗涤。媒染剂：滴加卢戈氏碘溶液，作用1分钟后，用水洗涤。脱色：在涂片上加入95%酒精2~3滴，频繁摇晃3~5秒，斜握载玻片让​​酒精流出；然后滴加酒精，重复此动作2~3次，直到流下来的酒精无色或略呈淡紫色，大约需要半分钟左右，直到变成淡紫色。水洗复染：加入稀石炭酸品红1/2~1分钟，水洗，待干，油镜观察。结晶紫与碘的复合物，不易被酒精脱色，仍保持紫色，称为革兰氏阳性菌。容易被酒精脱色然后复染成红色的细菌称为革兰氏阴性菌。染色性、形态、排列）、绘制革兰氏染色的意义 细菌鉴定：鉴定G+、G-、初筛标本、药物选择、大部分致病物质？ G+外毒素、G-内毒素 细菌材料玻片标本制备涂片- -----干燥------固定涂片：先取一个生理盐水接种环置于玻片一端，盛放菌液左手试管，右手接种环，用接种环从试管培养液中挑取少量大肠杆菌或葡萄球菌培养液与生理盐水混合，涂于涂片约1厘米直径。涂片应薄而均匀。

干燥：涂片最好放在室温下自然干燥。固定：握住载玻片一端，试样朝上，在火焰外层来回传递3次，约2～3秒。将载玻片背面接触皮肤，以免感觉过热。待凉后染色。拔、塞试管盖时掌握无菌操作，试管口用火焰微烧；接种环使用前后，灭菌固定的目的①？杀死微生物并修复其细胞结构②？确保菌体能牢固地附着在载玻片上，以免在洗涤过程中被水冲走。细菌生长繁殖的条件 充足的养分 水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 适宜的外部环境温度 pH 气体渗透压 培养基类型1.按培养基成分划分（1)@ >合成培养基，合成培养基的各种成分都是已知的化学物质，这种培养基的化学成分清晰，成分精确，重复性强，但价格相对较高，微生物生长缓慢培养基中。如高氏1号合成培养基、查氏()培养基等。后者是用来培养细菌的，这种培养基的化学成分很不稳定，很难确定，但是容易制备，营养丰富，所以经常使用。（3)半-合成培养基。

在天然有机物的基础上，适当加入已知成分的无机盐，或在合成培养基的基础上加入一些天然成分，如培养霉菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物的营养需求。 2.根据培养基的物理状态，固体培养基分为（1)固体培养基。在培养基中加入凝固剂液体培养方法，如琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基是常用于微生物的分离、鉴定和计数（2)液体培养基。液体培养基中不添加混凝剂。该培养基成分均匀，微生物可以充分接触和利用培养基中的营养物质，适用于生理研究，由于发酵速度高，操作方便，也常用于发酵工业。（3)半固态培养基。加入少量对液体培养基的促凝剂，可用于观察细菌的生长、运动、菌种鉴定、噬菌体滴度测定等3.根据培养基用途分：（1)@ >富集培养基，就是在培养基中加入血液、血清、动植物组织进行提取act 用于培养某些要求更高的微生物。 （2)选择性培养基。它是根据某种微生物的特殊营养要求或对某些物理和化学抗性而设计的培养物。这种培养基可用于从混合微生物中分离出所需微生物。（ 3)鉴别培养基。就是在培养基中加入一定的试剂或化学物质，使培养后产生一定的物质。有各种变化来区分不同种类的微生物。一、平板划线法（操作）平板划线法是一种分离培养法，接种培养单菌落的实验程序（平板划线法）不要说话，严格无菌操作，烧完后冷却接种圈。取一圈葡萄球菌或大肠杆菌划线时手腕用力，不要将接种环嵌入琼脂中。分散细菌